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LNA身份大揭秘

2022/9/23 18:13:25 浏览次数:781

LNA身份大揭秘

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1什么是LNA?

LNA是一种寡核苷酸衍生物,核糖的2’和4’间通过氧亚甲基桥连接成环。该结构能够降低核糖结构柔韧性,使磷酸盐骨架局部结构的稳定性增强,在某种程度上增加碱基堆积力,有利于双链形成。并赋予了LNA高亲和力、抗核酸酶分解能力等特性。

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2LNA有哪些特性?

高亲和力:稳定性LNA/LNA > LNA/RNA > LNA/DNA; 其中LNA/DNA每增加一个LNA单体,Tm提高2-6℃,LNA/RNA每增加一个LNA单体,Tm提高3-9℃;随着LNA数量的增加,单个LNA所引起的Tm变化逐渐降低。


碱基错配识别能力:LNA/DNA杂交链中含有一个错配碱基Tm值下降至少20℃,在DNA双链中Tm值仅下降4-16℃。


抗核酸酶切割能力:数据表明siRNA在血液中会被核糖核酸酶迅速分解,但在末端修饰两个LNA单体后可在血液中保持6小时以 上,相对于未修饰siRNA稳定性增加了4倍。


3LNA探针设计原则

1:LNA与LNA之间结合稳定性最强,因此应避免自身互补或与其他含LNA的寡核苷酸互补;

2:GC含量保持在30-60%之间;

3:避免单条序列超过4个LNA碱基,除非设计的寡核苷酸非常短(9-10个核苷酸);

4:避免对3个以上Gs或Cs进行LNA修饰。


4LNA的应用一:

核酸药之反义寡核苷酸(ASOs)

反义寡核苷酸(ASOs)是人工合成的核酸类似物(~12~30nt),与RNA结合通过Rnase H诱导降解或空间阻断作用来调节基因表达并干扰蛋白质合成。在目前无法成药的疾病中,RNA靶标远多于传统蛋白质靶标。且基于碱基配对的设计标准和高靶标特异性的优点,使得治疗性寡核苷酸作为精准药物潜力巨大。1978年首次证明ASO概念,1998年首次面世,目前已有15种被批准用于临床。


通过LNA修饰的ASOs可以实现:

1:与靶标序列更强的亲和力;

2:降低非特异性结合及非特异性切割的发生率;

3:与硫代修饰的传统ASO相比,具有更低的细胞毒性;

4:增强对限制性核酸内切酶、核酸外切酶及聚合酶延伸的抗性。


5LNA的应用二:

核酸检测之 SYBR Green 法 qPCR 引物增强

LNA 优化的引物可提高对靶标检测的灵敏度(尤其是富含 AT 的模板)及定量的准确性和特异性。适用于 RNA 产量低的样本(即血清/血浆、FFPE 切片和 LCM 样本)能够从前体中更好的区分高度相似的 miRNA 和成熟的 miRNA


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作为BHQ淬灭剂的原始制造商,通过整合BHQ本身的优势,可以帮您充分利用挖掘LNA技术对寡核苷酸的性能改进能力。


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