一、淋球菌

淋球菌是淋病的病原体，学名淋病奈瑟球菌，主要引起男、女泌尿生殖道的化脓性感染。在男性主要表现为尿道炎，出现尿频、尿急、尿痛、尿道脓性分泌物。在女性为宫颈炎，典型表现为宫颈口有黏液脓性分泌物，可因同时伴有尿道炎而出现尿道刺激症状。但60%的女性淋病患者无明显自觉症状，呈亚临床或带菌状态。无症状女性淋病携带者在传播淋球菌感染中起重要作用，也是引起新生儿淋病的主要原因。所以，在孕前优生健康检查中准确地筛查出女性淋病携带者对预防新生儿淋病有重要的实际意义。

淋球菌的实验室检查方法可分为三大类：

病原体检查：包括涂片镜检法，淋球菌培养及相关生化鉴定；

分子生物学检测：如 PCR方法测核酸DNA；

免疫学检测：如免疫层析法测抗原。

涂片镜检法

方法：用拭子取男性前尿道分泌物或女性宫颈分泌物均匀涂抹在玻片上，经固定及革兰染色后，在显微镜下寻找具有典型形态特征的淋球菌，当多形核白细胞胞浆内有成对排列的革兰阴性双球菌时判定为阳性结果。

优点：简便快捷，成本低廉；对男性淋病的准确度可达到95%以上。

缺点：患者检查前若曾服用抗生素，涂片法将难以找到典型特征的淋球菌；不能用于女性淋病的筛查。因女性宫颈，阴道中杂菌较多，有些杂菌形态与淋球菌相似，涂片镜检难以区分杂菌与淋球菌。即使是有丰富经验的检验人员，用涂片法筛查女性淋病患者的准确度也不会超过50%。所以，世界卫生组织(WHO)明确规定，不能单独应用涂片法来筛查女性淋病患者。

淋球菌培养法

方法：用T-M选择性培养基对男、女生殖道分泌物标本进行淋球菌分离培养，如有可疑的淋球菌菌落生长，可通过氧化酶试验，过氧化氢酶试验，革兰染色进行初步鉴定，必要时辅助生化反应如糖发酵试验进行确认。淋球菌培养法是经典的淋病检验方法，是理论上的"金标准"试验。

优点：培养结果阳性时能确认淋病患者无误，特异性几乎达100%;淋球菌培养物可用于药物敏感性试验，对指导临床用药，监测淋球菌耐药发生具有重要价值。

缺点：敏感性随实验室的条件和技术而异，可有一定程度的漏检；耗时约48h，操作略繁琐。

问题在目前的实际工作中，引起淋球菌培养法漏检患者的原因主要在3个环节:1、标本取材不准确。女性淋球菌易感在宫颈柱状上皮细胞，应采集宫颈管内的分泌物，其中淋球菌多为存活的；但在实际工作中，临床医生往往会错误地取阴道分泌物(如后穹隆标本)进行淋球菌培养，其中淋球菌数量少且多已死亡，造成淋球菌培养假阴性。2、标本运送，接种不及时。淋球菌离开人体之后，对外界环境如干燥的抵抗力很弱。为了保证培养成功，取材后应立即接种于培养基，或置于运送培养基中送至中心实验室进行培养。3、培养基质量不佳或配制时间过长。培养时CO2浓度及温、湿度不符合淋球菌的最佳生长条件。

核酸检测法

抗原检测或核酸检测属淋球菌检测方法中非培养技术，有不依赖标本中淋球菌活性特点，一定程度上允许采用阴道分泌物作为标本，标本运送也无需特殊条件，标本采集之后保存在适宜条件下可以放置较长时间而不会影响检测结果的准确性。PCR是核酸检测法的代表，检测淋球菌的DNA。

优点：敏感性高，特异性好；对标本采集及运送要求不高。

缺点：需要PCR仪，对场地、环境和设备等要求均根高；操作过程复杂，试剂成本较贵：要求在经卫生部临床检验中心认可的"临床基因扩增检验实验室"中开展核酸检测，检验人员需要专项培训获得资质方可上岗操作。

免疫层析法测抗原

方法：通过检测标本中淋球菌特异性抗原来判断。由于该类方法因检测对象为淋球菌抗原，所以无论标本中淋球菌是否死活均可以顺利检出。目前，商品化的抗原检测方法有免疫层析法。

免疫层析法因无需任何辅助仪器设备，可在短时间内获得结果。在国家孕前优生健康检查项目中，往往要求同时检查淋球菌和沙眼衣原体。目前，市场上已有商品化的淋球菌/沙眼衣原体抗原二联检测试剂盒。据介绍，仅需一支宫颈拭子标本，可在15min内同时获得淋球菌和沙眼衣原体两项检测结果。

优势：

敏感性和特异性均较好，标本中淋球菌死活及患者诊前用药均不影响检测结果；

操作简便快捷，15分钟出结果，无需任何辅助仪器；

常温运输、保存、使用。

二、生殖道沙眼衣原体

沙眼衣原体是一类在细胞内寄生的微生物，引起的泌尿生殖道感染已成为常见的性传播疾病。可分15个血清型，其中A/B/Ba/C引起沙眼，D/E/F/G/H/I/J/K引起生殖道感染，L1/L2/L3引起性病性淋巴肉芽肿。它可引起男性尿道炎，附睾炎，女性宫颈炎，盆腔炎，宫内感染等多种疾病，尤其是在与淋球菌等合并感染时可加重疾病的发展并引起其它并发症。孕妇生殖道感染沙眼衣原体可导致新生儿眼炎和肺炎，在孕前优生健康检查项目中进行淋球菌及沙眼衣原体检查，对预防新生儿疾病具有重要的现实意义。由于沙眼衣原体感染者中，有50%的男性和70%~80%的女性常表现为无临床症状，所以其实验室检查具有重要作用。

沙眼衣原体实验室检查方法主要分三大类：

细胞培养法，检测过程类似病毒分离培养；

分子生物学方法，如PCR测核酸DNA；

免疫学方法，如免疫层析法测抗原

细胞培养法

细胞培养法是诊断沙眼衣原体感染的"金标准"，优点是特异性接近100%，缺点是敏感性不够(60%-80%)。细胞培养对实验室技术要求较高，实验成本高且操作繁琐，时间较长，需很好的实验室条件及实验技术。多用于科学研究，用于临床诊断检测较少。

分子生物学方法

检测标本中沙眼衣原体的核酸(DNA 或 RNA)判断是否感染沙眼衣原体。最常用的核酸检测方法为荧光定量PCR测DNA，该类方法的敏感性和特异性均较高，但需昂贵的仪器和严格的实验室条件。

免疫层析法测抗原

从男性尿道或女性宫颈分泌物标本中检测是否存在沙眼衣原体抗原，从而判断是否有沙眼衣原体感染。该类方法是国内目前诊断沙眼衣原体感染的主要方法，其中，以免疫层析法最为常见。

优势：

15分钟出结果，无需任何辅助仪器；

应用最新的协同抗体技术，敏感性、特异性优于同类产品；

试剂运输、保存、使用都在常温条件下。

淋球菌和沙眼衣原体联合检测的必要性

1、淋球菌与衣原体感染部位相同，可以同时检测。

淋球菌与沙眼衣原体均好侵犯人泌尿生殖道柱状上皮细胞，如男性前尿道，女性宫颈管。

两种微生物的感染部位相同，所以一次取材即可以完成两种病原体的检测。

2、两者常合并感染，有必要同时检测。

淋病患者中，约50%合并有沙眼衣原体感染。

两者症状相似，仅从临床症状体征难以准确区分。

3、两者治疗方案不同，必须同时检测。

淋球菌涂片及培养法常将不典型淋病误诊为“非淋”而导致患者久治不愈。

淋球菌/沙眼衣原体二联检测试剂，取一个标本出两个结果，可以准确鉴别“淋病”及“非淋”，有利于患者及时接受正确治疗。

淋球菌/沙眼衣原体抗原二联检测卡中含两根并联的测试条，采用抗原抗体反应及免疫层析技术来定性检测临床标本中是否含有淋球菌/沙眼衣原体抗原。

三、白色念珠菌

念珠菌是一种内源性真菌，它可以侵犯皮肤、粘膜和内脏，表现为急性、亚急性和慢性炎症。对人体致病的念珠菌有七种，其中以白念球菌在临床上最为常见，其毒力也最强。人类生殖器官皮肤粘膜的念珠菌感染称为生殖器念珠菌病。

白色念珠菌可引起女性的外阴及阴道炎症，主要表现为外阴及阴道瘙痒及豆渣样白带。可通过性交传染给男性，引发男性的念珠菌性龟头炎和包皮龟头炎。

其实验室检查方法有：1）湿片法：涂片显微镜检查；2）分离培养法；3）核酸检测法，如DNA探针或PCR试验；4）免疫学检查，如免疫层析法。

目前，湿片法是临床常用的方法。必要时可做培养和菌种鉴定。免疫荧光法及核酸检测法因需相应仪器设备及操作人员的技术要求而很少使用。

涂片镜检法(湿片法)

取阴道分泌物制成等渗生理盐水涂片，在显微镜下观察到假菌丝，卵圆形孢子或芽生孢子即为阳性。此方法优点为成本低廉，报告结果快速。缺点是对检验人员有一定的技术要求，因个人经验及责任心的差别可造成不同程度的主观误差,敏感性较低，结果阴性不能排除念珠菌感染。

培养法

取阴道分泌物接种到念珠菌培养基上，37℃培养48-72h，观察有无念珠菌生长，必要时进行念珠菌鉴定试验。此方法优点为敏感性好，可进行念珠菌分型及药敏试验，对治疗及预后有指导意义；缺点是需相关仪器设备，报告结果所需时间较长，需3-4天。

PCR方法

由于PCR检测技术对实验室条件及检验人员的技术要求较高，试剂成本较贵，故PCR多限于科研用途，很少作为念珠菌临床检测技术使用。

抗原检查

通过检测阴道分泌物中是否存在念珠菌抗原来判断。目前，市场上可商品化供应的试剂有免疫层析法。鉴于涂片镜检法的敏感性受检验人员主观误差影响较大，敏感性从60%~80%不等；免疫层析法的敏感性为87.9%，特异性为98.4%。因此，从科学性及实用性两方面面言，免疫层析法检测阴道分泌物中的念珠菌抗原是值得在临床推广应用的念珠菌检验新技术。

优势：

1、本试剂盒为念珠菌属特异性，除了能检测白色念珠菌外，还能检测出光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌等其他念珠菌。

2、适合浅表念珠菌（阴道炎VVC、包皮龟头炎、甲沟炎、口腔念珠菌、尿布皮炎）和深部念珠菌（消化道、呼吸道、泌尿道)的诊断，标本取材为阴道分泌物、包皮垢、口腔拭子、腔道拭子、尿液沉渣。

3、设定的检出限为105CFU/ml，能很好的区别念珠菌正常携带者和念珠菌病患者。

四、阴道毛滴虫

毛滴虫为一种有鞭毛的原虫。寄生在人体的毛滴虫有3种，即口腔毛滴虫、人毛滴虫和阴道毛滴虫。前两者在人类病因学上无意义，后者能引起人的泌尿生殖道疾病，称为毛滴虫病。

阴道毛滴虫可通过性交直接传播，也可以通过被污染的毛巾、游泳衣裤、浴缸等物品而间接传播。世界卫生组织将阴道毛滴虫病作为性传播疾病。

阴道毛滴虫引起女性阴道炎，以泡沫状阴道分泌物为典型表现。男性患者症状轻微，有时表现为慢性前列腺炎的症状。

本病与某些其他性传播疾病的症状近似，故单纯以临床症状难以做出诊断，需用实验方法检出阴道毛滴虫方可确诊。

目前，实验室检查滴虫的方法有：1）湿片法（涂片显微镜镜检）；2）培养法；3）核酸检测法，如PCR；4）免疫学方法测抗原，如免疫荧光法、免疫层析法。

湿片法（涂片镜检）是临床常规检测方法，优点是快速方便，缺点是因环境温度、个人经验及责任心的差别可造成不同程度的主观误导致敏感性较低。

培养法是检查阴道毛滴虫最为敏感和特异的方法，但因操作麻烦，耗时很长通常不作为常规检测。免疫荧光法和核酸检测方法需相应仪器设备及对操作人员的技术要求而限制其使用。采用免疫层析法检测滴虫抗原，操作简单方便，15分钟可出结果，临床使用效果显示结果准确性非常高，是值得在临床推广应用的滴虫检验新技术。

白色念珠菌/阴道毛滴虫联合检测的必要性

念珠菌和滴虫是女性生殖道内易感病原体，是白带常规中的必查指标，同时检查既方便也符合临床需要。

优势：

准确：与湿片镜检法相比，可克服患者就诊前阴道局部用药对检测结果的影响。基本没有检验人员的主观误差。

快速：在15分钟之内，一个检测卡同时完成念珠菌和滴虫两种病原体的检测。

简便：操作过程中无需辅助仪器，没有经验的操作人员亦能检测出标准结果。

五、细菌性阴道病（BV)

细菌性阴道病主要是由于阴道正常菌群的生态平衡发生紊乱，优势菌群乳酸杆菌减少或消失，阴道加特纳菌、厌氧菌及人型支原体等微生物过度生长而引起的一种常见疾病。该病以阴道分泌增多，伴有鱼腥味气味为特征。其发病与性活动有关。

细菌性阴道病的诊断主要根据临床特征，以下4个指标中满足3个即可诊断：1）阴道壁上附有稀薄而均匀一致的灰白色分泌物；2）阴道分泌物的PH值＞4.5；3）嗅试验阳性；4）分泌物镜检线索细胞阳性。

嗅试验为取一滴阴道分泌物置于载玻片上，加一滴10%KOH，闻到氨味或鱼腥味气体即为嗅试验阳性，该方法的主观误差大，在临床上很少使用；阴道分泌物涂片，在显微镜下观察线索细胞的有无是临床常用的实验方法，但仍需要有一定的实验条件及操作人员技术水平要求。上述4个指标中，1为临床医生观察的症状；2和3原理相通，且通过以往临床研究表明，通过PH值测定阴道菌群改变是BV诊断最灵敏的指标。

细菌性阴道病检测试剂卡内含精密PH试条，干燥条件下独立包装，临用前打开，特殊设计手柄避免误触测试区，充分保障PH测试结果的准确性；仅需1分钟即可获得检测结果。

阴道炎联合检测的应用

白色念珠菌/阴道毛滴虫抗原二联检测试剂盒与细菌性阴道病（BV）检测试剂卡联合应用。

鉴于白色念珠菌/阴道毛滴虫/细菌性阴道病感染泌尿生殖道的部位相同，症状部分相似，且常合并感染，故可用三联检测，在仅需一次取样及标本处理过程的条件下，同时完成阴道分泌物PH值检测和念珠菌/滴虫两种病原体的检测，极大地方便了患者及临床检验人员。

关于南京黎明生物

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黎明生物自主研发的彩色乳胶颗粒标记的免疫层析技术是在传统的"金标"方法上的改良，不但增强了试剂的敏感性和特异性，而且使快诊试剂从"单色"时代来到了"彩色"时代。

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